PCR测序试剂盒

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产品编号 SQK-PSK004

产品说明

推荐以下用户使用该试剂盒：

DNA的起始量较低
希望优化通量测序实验
需要控制读长
对靶向扩增子测序感兴趣。

PCR测序试剂盒（PCR Sequencing Kit）适用于当起始gDNA数量有限时的测序建库。

在Covaris g-TUBE 中将gDNA样本片段化。经剪切的末端通过NEBNext末端修复/ dA尾添加模块（NEBNext End Repair/dA-tailing module）进行修复和dA尾添加，再将含有引物结合位点的接头连接至制备好的末端上。之后进行扩增步骤，使用含由5’标签的引物以促进快速测序接头（Rapid Sequencing Adapter）的无连接酶贴附。

使用试剂盒需进行约50分钟的预PCR准备工作。PCR步骤各不相同（取决于循环数，聚合酶速度和模板长度）。标准步骤建议起始gDNA为100ng：可以使用更少量，但是可能需要增加PCR循环数。PCR后的步骤大概需要10分钟。

PCR测序试剂盒（PCR Sequencing Kit）特征：

特征	性质
制备时间	60分钟+PCR
起始样本要求	<100 ng gdna
是否需要PCR	是
片段化	可选
读长	等同于PCR后的片段长度
产生读长类型	1D
典型通量*	...
相关实验方案	PCR测序试剂盒（PCR Sequencing Kit）
混样建库测序可选产品	PCR 条码试剂盒（PCR Barcoding Kit）芯片清洗试剂盒（Flow Cell Wash Kit）
包装规格	6个反应
稳定性	运输温度：2–8°C 长期储存温度：-20°C
兼容性	测序芯片： FLO-MIN106 FLO-MIN107

PCR后产生的片段长度取决于PCR中实用的输入物料长度，并受到DNA聚合酶持续合成能力的限制。这意味着，使用PCR测序试剂盒（PCR Sequencing Kit）可以获得更好的片段长度，相比之下，快速PCR条码试剂盒（Rapid PCR Barcoding Kit）只能达到~2 kb。因此，在起始物料有限（即需要使用PCR）但所需读长超过快速PCR条码试剂盒（Rapid PCR Barcoding Kit）所能达到的长度时，该试剂盒便可提供解决方案。

在使用PCR测序试剂盒（PCR Sequencing Kit）（A）和快速PCR条码试剂盒（Rapid PCR Barcoding Kit）（B）制备文库时均观察到了典型的读长直方图。

该试剂盒同时允许用户使用同一5’组对其自己的特异性扩增子打标签，简化了下游PCR后的处理流程。这是通过四引物PCR实现的。用户将5’尾添加至其自己的引物序列上，可作为一系列带条码“外延”引物（PCR条码试剂盒附带）的引发位点，这些引物包含5’标签，可以促进快速测序接头的无连接酶贴附。

进一步考虑：

除了用于生成更多的材料（在起始材料有限的情况下），PCR还可用于纯度不高的样本（不纯样本可抑制文库构建效率）；PCR选择合适的分子作为为模板进行扩增。原始杂质丢失或稀释。在实验中可以经常看到，加入 PCR 步骤能够对产生较差测序结果的样本进行改善。在起始样本少于1ng的情况下，我们推荐进行全基因组扩增。

盒内物品

PCR测序试剂盒（PCR Sequencing Kit）包含充足的试剂，足以构建6个测序文库。