PCR条码试剂盒

推荐以下用户使用该试剂盒：

• 希望使用混样测序来降低每个样本测序价格
• DNA的起始量较低
• 希望优化通量测序实验
• 需要控制读长
• 对cDNA或靶向扩增子测序感兴趣。

当单个样本所需的数据量小于单个测序芯片所能生成的数据总量时，则可以使用条形码标签或 混样文库测序：它允许用户将多个样本混合，并同时进行测序，从而更有效地使用测序芯片。

将多个样本在一个测序芯片上进行混样测序可以降低用户每个样本的测序成本。以下为部分样例：（**注：表中的数字仅代表消耗品的基本参考价格）

**注：表中的数字仅代表消耗品的基本参考价格

PCR条码试剂盒（PCR Barcoding Kit）适用于当起始物料有限，且为来自多个样本的gDNA时的条码测序建库。它可同时搭配PCR cDNA测序试剂盒（PCR cDNA Sequencing Kit）（SQK-PCS108）以制备带条码的cDNA测序文库。

可以在Covaris g-TUBE 中将gDNA样本片段化。经剪切的末端将通过NEBNext末端修复/dA尾添加模块（NEBNext End Repair/dA-tailing module）进行修复和dA尾添加，再将含有引物位点的接头连接至制备好的末端上。试剂盒中含有12x引物对，可用来扩增每个样本：每对引物对中包含一个条码和5′，可促进快速测序接头的无连接酶贴附。快速测序接头进而可被添加至聚在一起的扩增过且带条码的样本集合中。

使用试剂盒需进行约50分钟的预PCR准备工作。PCR步骤各不相同（取决于循环数，聚合酶速度和模板长度）。标准步骤建议起始gDNA为100ng：可以使用更少量，但是可能需要增加PCR循环数。PCR后的步骤大概需要10分钟。

PCR条码试剂盒（PCR Barcoding Kit）特征：

PCR后产生的片段长度取决于PCR中实用的输入物料长度，并受到DNA聚合酶持续合成能力的限制。这意味着，使用PCR条码试剂盒（PCR Barcoding Kit）可以获得更好的片段长度，相比之下，快速PCR条码试剂盒（Rapid PCR Barcoding Kit）只能达到~2 kb。因此，在起始物料有限（即需要使用PCR）但所需读长超过快速PCR条码试剂盒（Rapid PCR Barcoding Kit）所能达到的长度时，该试剂盒便可提供解决方案。

在使用PCR条码试剂盒（PCR Barcoding Kit）（A）和快速PCR条码试剂盒（Rapid PCR Barcoding Kit）（B）制备文库时均观察到了典型的读长直方图。

该试剂盒同时允许用户使用同一5′组对其自己的特异性扩增子加条码和打标签，简化了下游PCR后的处理流程。这是通过四引物PCR实现的。用户将5′尾添加至其自己的引物序列上，可作为一系列带条码“外延”引物（PCR条码试剂盒附带）的引发位点，这些引物包含5′标签，可以促进快速测序接头的无连接酶贴附。

利用 Albacore 和 EPI2ME 能够对条形码标记的测序数据进行去卷积（反卷积， deconvolution）分析，通过对条形码序列进行分类，并将读长分类到其对相应的文件夹中。

进一步考虑：

除了用于生成更多的材料（在起始材料有限的情况下），PCR还可用于纯度不高的样本（不纯样本可抑制文库构建效率）；PCR选择合适的分子作为为模板进行扩增。原始杂质丢失或稀释。在实验中可以经常看到，加入 PCR 步骤能够对产生较差测序结果的样本进行改善。在起始样本少于1ng的情况下，我们推荐进行全基因组扩增。

PCR条码试剂盒（PCR Barcoding Kit）包含12个特有的条形码标签和充足的试剂，足以构建6个测序文库

同时提供测序芯片制备试剂盒扩展包（Flow Cell Priming Kit Expansion Pack）。